产品货号：
KD1310
中文名称：
Y187-pHis2系统酵母单杂培养基套装
英文名称：
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit
产品规格：
1Set
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：RT
产品编号：KD1310(序号1-7)，KD1311(序号1-8)
储存温度：序号1-7常温保存；序号8需-20℃储存，蓝冰运输
产品组成：(0.5L/pouch)
产品说明：
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit(酵母单杂培养基套装KD1310)，含有用于Y187-pHis2系统酵母单杂交文库筛选的全套培养基，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制0.5L的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5L的ddH2O，然后121℃灭菌15分钟即可。无需称量和调整pH值。
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit (KD1311)在试剂盒KD1310基础上增加了100mL 3-AT溶液(2.5M，过滤除菌)。
实验材料：
酵母菌株：Y187(缺陷基因型his3-200、trp1-901、leu2-3)
诱饵载体：pHis2-DNA(筛选标记Trp报告基因His)
文库载体：pGADT7-cDNA(筛选标记Leu)
实验步骤：
一、转化诱饵载体(参考KD0256中质粒转化步骤)
1.YPDA平板培养划线，活化Y187酵母菌种；挑酵母菌落于液体YPDA培养基摇菌培养；
2.制备感受态并将pHis2-DNA转化进入感受态细胞；
3.SD/-Trp平板检测转化结果。
二、自激活检测
1.制备不同3-AT浓度梯度的SD/-His/-Trp平板(φ150mm)，3-AT的浓度一般设定在50～100mM之间，并设置不含3-AT的对照；
2.将上述转化产物稀释到单克隆水平(OD值＜0.002)，涂板。
3.筛选出适宜的3-AT浓度。(如某浓度3-AT平板上的菌落弱小且稀疏，与对照相比差距明显，且延长培养时间也不会再生长，即为理想的3-AT浓度)
三、互作筛选(具体步骤参考KD0256中文库转化步骤)
1.液体SD/-Trp培养基培养诱饵菌株Y187(pHis2-DNA)，制备Y187(pHis2-DNA)感受态细胞；
2.将pGADT7-cDNA文库转入Y187(pHis2-DNA)感受态细胞；
3.转化产物(取10μL稀释10倍，100倍，1000倍)涂SD/-Leu/-Trp平板各一块，用于计算转化效率；剩余转化产物全部涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT(X为筛选所得浓度)平板50块(φ150mm)，培养3～5天；
4.挑取SD/-His/-Leu/-Trp平板上克隆，PCR(推荐KD2250)后测序鉴定；
5.点对点验证。
培养基配制方法：
1.一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5L去离子水中溶解(琼脂冷水不溶)。
2.无调整pH值，121℃高压灭菌15min。
3.液体培养基封好口避光、室温储存备用。
4.固体培养基冷却到50℃左右倒入平板，室温凝胶，封口倒置4℃保存。
3-AT的使用方法：
1.计算所需平板的数量，配制培养基；
2.设置3-AT的浓度梯度；
3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55℃左右，按设置浓度加入3-AT母液，摇匀后倒板；
4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝胶后，将转化产物涂板，28～30℃培养3～5天。
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